Page 52 - MaSzeSz hírcsatorna 2026/2.
P. 52
SZAKMAI - TUDOMÁNYOS ROVAT
immuntesztek egyik jelentős korlátja a ke- protokollokat és stratégiákat dolgozzanak ki. egyes vegyületek vagy keverék minták kvalita- A teljes sejtes bioszenzorok állati és emberi
resztreaktivitás; a rendelkezésre álló antites- A kockázatértékelésükhöz szükséges vizsgá- tív elemzésére alkalmasak, és az eredmények szöveteken/sejtvonalakon, baktériumokon,
tek sokszor nem tudnak megfelelően különb- lati eljárásokat és szabályozási keretrendszert olykor a keresztreaktivitás miatt nehezen ér- vagy eukarióta mikroorganizmusokon, pél-
séget tenni a hormonok, illetve különböző létrehozó programok közé tartozik a US EPA telmezhetők. A szteroid ösztrogének az öszt- dául élesztőgombákon alapulnak. Az in vitro
metabolitjaik között, ezért a kapott adatok kétlépcsős Endokrin Rendszert Károsító Anya- rogénreceptorokhoz kötődve, agonista anya- vizsgálatok közül ilyen például az ER-CALUX
gyakran csak „összes ösztrogénaktivitásra” gok Szűrési Programja (EDSP - Endocrine Dis- gokként zavarják meg az endokrin rendszert, teszt, amelyben T47D humán emlőtumor
vagy „E2-ekvivalens” koncentrációra vonat- ruptor Screening Program), a Japán Környe- ezért az egyik legelterjedtebb megközelítés sejteket használnak, amelyek endogén ER-t
koztatva értelmezhetők, és csak egyszer zetvédelmi Ügynökség stratégiai programja az ösztrogénreceptorokon, kötődési affinitá- expresszálnak, három ösztrogén-válasz ele-
használatosak. Az immunkémiai módszerek (SPEED - Strategic Programs on Endocrine son alapuló in vitro, sejtes riportervizsgálatok met (ERE – Estrogen Responsive Element)
ugyanakkor nagy áteresztőképességű lehető- Disruptors), valamint a Gazdasági Együttmű- alkalmazása. Ezek a vizsgálatok nagy min- tartalmaznak, melyet ösztrogénre reagá-
séget kínálnak, ezért szűrővizsgálatokra, nagy ködési és Fejlesztési Szervezet (OECD - Or- taáteresztő képességű és költséghatékony ló luciferáz riportergénnel transzfektáltak.
mintaszámú felmérésekre költséghatékony ganisation for Economic Co-operation and módszert nyújtanak az ösztrogének ösztro- Az ER-CALUX vizsgálatban a sejtek ösztrogé-
megoldást nyújtanak, miközben a pontos, Development) által támogatott, az endokrin génreakciót kiváltó potenciáljának értékelé- neknek való kitettsége az endogén ER-hez
vegyületspecifikus meghatározást HPLC– diszruptorok vizsgálatával és értékelésével sére az ösztrogénreceptorhoz való kötődés, való kötődést, a receptor aktiválódását, és
MS/MS mérésekkel erősítik meg (Chang et foglalkozó közös munkacsoport (EDTA - és ezáltal egy riportergén (jelzőgén) kifejező- következésképpen a ligand-receptor komp-
al., 2018; Czarny et al., 2017; Glineur et al., Joint Working Group on Endocrine Disrup- désének számszerűsítésével. Korlátaik, hogy lexnek a stabilan integrált luciferáz gén pro-
2020; Olesti et al., 2021; Stanczyk & Clarke, ters Testing and Assessment). Európában nem tudják modellezni az élőlények szerve- móter régiójában jelen lévő ERE-khez való
2010; Q. Wang et al., 2016). az EDC-k osztályozására és szabályozására zetében zajló komplex élettani folyamatokat kötődését eredményezi. Ez a luciferáz gén
Az endokrin rendszert károsító anyagok irányuló erőfeszítések 1999-ben kezdődtek. például a felvételt, eloszlást és anyagcserét, expressziójához vezet, amelyet a sejtek lízi-
(EDC-k) meghatározására irányuló törekvé- Az Európai Unió elfogadta az „Endokrin rend- illetve nem tudják felismerni a különböző sével, a luciferin szubsztrát hozzáadásával
sekkel kapcsolatos legfőbb vitapont az a „ká- szert károsító anyagokra vonatkozó közösségi életciklusok hormonérzékeny szakaszait, és a fénykibocsátás luminométerrel történő
ros” kifejezés használata. Ahhoz, hogy egy stratégiát” (Community Strategy for Endocri- így megbízhatatlan előrejelzésekhez vezet- mérésével vizsgálnak. Az MVLN teszt vizsgá-
vegyi anyagot szabályozás alá vonjanak, be ne Disrupters) az ilyen anyagok elleni fellépés hetnek. Mindazonáltal az in vitro vizsgálatok lat elvei hasonlóak az ER-CALUX elveihez.
kell bizonyítani, hogy káros hatást vált ki; ez érdekében. E stratégia keretében összeállítot- hatékonyak a kezdeti előszűréshez (scree- Az MVLN azonban az MCF-7 humán eredetű
azonban az endokrin rendszert károsító ha- tak egy listát, amely 575 olyan anyagot tar- ning vizsgálatok) és gyors, hozzávetőleges emlőrákos sejtvonalat használja, amely endo-
tások területén bonyolult kérdés, mivel a je- talmaz, amelyekről a közzétett tanulmányok becslést és elsődleges rangsorolást adnak gén ER-t expresszál, és amelybe szintén egy
lenség kettős természetű. Például az „öszt- és jelentések alapján feltételezhető, hogy ED az ösztrogén hatás erősségéről. Előszeretet- ösztrogénre reagáló luciferáz riportergént jut-
rogén hatás” önmagában nem káros hatás, hatással bírnak. Ezek közül 320 esetében ta- tel alkalmazzák ezeket környezeti monitoring tattak be. Az ER-CALUX-vizsgálathoz hason-
hanem a hormonok természetes működési láltak bizonyítékot a hormonrendszert zava- programokban, különböző környezeti minták lóan a vizsgált vegyület ösztrogénspecifikus
mechanizmusa, amelyet homeosztatikus ró hatás tekintetében, amely lista napjainkra (természetes- és szennyvíz, illetve trágya min- transzkripciós aktivitása közvetlenül össze-
mechanizmusok szabályoznak. Azonban egy tovább bővült (European Commission, 1999; ták) minősítésére is. Ezen túlmenően hozzá- függ a lizátumában mért, kezelt MVLN-sejtek
ösztrogén tulajdonságokkal rendelkező vegyi Fisher, 2004; Hamid & Eskicioglu, 2012). járulnak az állatkísérletekben használt etikai luciferáz-aktivitásával, mely spektrofotométer
anyag, amely az endokrin rendszerben a szo- Szemben az analitikai módszerekkel, a bio- alapelv a „3R-stratégia” (helyettesítés - rep- segítségével kimutatható. Az MVLN teszttel
kásos kontextustól eltérő módon vagy ha- lógiai hatásmérésen alapuló biotesztek cél- lacement, csökkentés - reduction és töké- azonosan az E-Screen teszt is a humán MCF-
sonló módon (pl. szteroid ösztrogének) egy ja nem egyes vegyületek koncentrációjának letesítés - refinement) alkalmazásához, mely 7 sejtvonalat használja, melynek mérési vég-
érzékeny fejlődési szakaszban hat, potenciá- kvantitatív kimutatása, hanem az összes jelen a kísérleti állatok humánus kezelését és védel- pontja a sejtek proliferációja. Ha a vizsgált
lisan káros hatást válthat ki. Az EDC-k, köztük lévő ösztrogénhatású anyag összegezett bio- mét szolgálja. A 3R-elv egyik célja az állatok minta ösztrogénhatású anyagokat tartalmaz,
az ösztrogén hormonok környezetben való lógiai aktivitásának mérése. A biológiai tech- szükségtelen használatának minimalizálása azok fokozzák a sejtek osztódását, amit opti-
széleskörű jelenléte arra késztette a külön- nikáknak az előnye adott esetben egyben és kiváltása in vitro módszerekkel. kai denzitás vagy fluoreszcencia alapján kvan-
böző országok kormányait, hogy vizsgálati a hátránya is lehet: nem szelektívek, ezért csak tifikálnak. Tanulmányok szerint az E-Screen
52 53
